BACKGROUND: Preparations of commercially available clotting factor VIII are complex protein mixtures. Most of them contain either von Willebrand factor or human serum albumin as stabilizers. The aim of the study was to quantify further proteins in twelve concentrates either of recombinant origin or derived from human plasma. METHODS: Proteins were separated by two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis (2D-PAGE). Some proteins were quantified by ELISA. RESULTS: Recombinant clotting factor preparations showed fewer protein spots in the 2D-PAGE, than plasma-derived preparations. Proteins identified in some of the plasma-derived concentrates included up to 90 ng/IU of the anaphylatoxin C3a, up to 40 ng/IU of the platelet a-granule protein thrombospondin-1, up to 0.85 ng/IU of the platelet a-granule protein platelet factor 4, 3.5 ng/IU myeloperoxidase secreted by leukocytes and up to 0.05 ng/IU of the leukocyte-secreted protein a-defensin. The protein content differed between concentrates from different manufacturers. CONCLUSIONS: The origin of the plasma used to prepare the factor concentrates might influence the protein impurities in these products. It is unknown whether the impurities observed have long-term consequences for chronic inflammatory conditions.
Hintergrund: Gerinnungsfaktorkonzentrate zur Behandlung von angeborenen hämostaseologischen Erkrankungen sind komplexe Proteinmischungen, die oft Von-Willebrand-Faktor und/oder Albumin als Stabilisatoren enthalten. Ziel dieser Untersuchungen war es, in zwölf unterschiedlichen Gerinnungsfaktorkonzentraten, die re-kombinant hergestellt oder durch Fraktionierung und Reinigung aus Blutplasma gewonnen wurden, weitere Fremdproteine zu quantifizieren.
Methoden: Proteine der ausgewählten Gerinnungsfaktorkonzentrate wurden durch 2D-Polyarcylamid-Gelelektrophorese aufgetrennt und mit Silber sichtbar gemacht. Einige Proteine aus je drei unterschiedlichen Produktchargen wurden über ELISA quantifiziert.
Ergebnisse: Die 2D-Gelelektropho-rese von rekombinant hergestellten Gerinnungsfaktorpräparaten zeigte erwartungsgemäβ deutlich weniger Proteinflecken als die Analyse von Präparaten, welche aus Plasma gereinigt worden waren. In Präparaten aus Plasma fand sich bis zu 90 ng/IE des Anaphylatoxins Komplement Faktor 3a, bis zu 40 ng/IE des thrombozytären a-Granula-Proteins Thrombospondin-1, bis zu 0,85 ng/IE Plättchen-Faktor 4, bis zu 3,5 ng/IU Myeloper-oxidase und bis zu 0,05 ng/IE a-Defensin. Die beiden letztgenannten Proteine werden aus aktivierten Leukozyten freigesetzt. Die Präparate unterschiedlicher Hersteller unterschieden sich im Gehalt von Fremdproteinen.
Schlussfolgerung: Der Ursprung des Plasmas, aus dem Gerinnungspräparate hergestellt werden, scheint die Art und Konzentration von Fremdproteinen in den Blutprodukten zu beeinflussen. Ob die Fremdproteine auf lange Sicht Einfluss nehmen auf chronisch-entzündliche Reaktionen in den behandelten Patienten, ist unbekannt.