A fast, sensitive, and specific reverse-transcription (RT) loop-mediated isothermal amplification (RT-LAMP) assay was developed that involved a single tube and a 1-step reaction for detecting infectious bursal disease virus (IBDV). Four specific primers were used for amplification of the VP2 gene of IBDV. The amplified LAMP products were detected by DNA electrophoresis and by direct observation with the naked eye in the presence of SYBR Green I. The sensitivity of RT-LAMP was determined to be 0.01 fg of IBDV viral RNA. This assay for IBDV is more sensitive than the conventional RT-polymerase chain reaction assay, which has a detection limit of 1 ng. The LAMP assay was also assessed for specificity and was found to precisely discriminate between positive and negative test samples. This newly established LAMP assay, combined with RT, is a practical diagnostic tool because IBDV-infected and uninfected clinical samples collected from an experimental farm could be discriminated. Full verification of a sample's IBDV status was obtained within 40 min of extraction of the viral RNA, which could then be directly added to the RT-LAMP reaction mixture.
Une épreuve rapide, sensible et spécifique d’amplification isotherme utilisant la transcriptase réverse (RT-LAMP) a été développée et utilisait un tube unique et une réaction en une étape pour détecter le virus de la maladie de la bourse (IBDV). Quatre amorces spécifiques ont été utilisées pour l’amplification du gène VP2 de IBDV. Les produits amplifiés par LAMP ont été détectés par électrophorèse de l’ADN et par observation directe à l’œil nu en présence de du colorant SYBR vert I. La sensibilité de RT-LAMP a été déterminée être de 0,01 fg d’ARN viral de IBDV. Cette épreuve pour l’IBDV est plus sensible que l’épreuve conventionnelle d’amplification en chaîne par la polymérase utilisant la transcriptase réverse (RT-PCR), qui a une limite de détection de 1 ng. L’épreuve LAMP a également été évaluée pour sa spécificité et a été trouvée être discriminatoire de façon précise entre les échantillons positifs et négatifs. Celle nouvelle épreuve LAMP, combinée à la RT, est un outil diagnostique pratique étant donné que des échantillons cliniques infectés et non-infectés par IBDV prélevés d’une ferme expérimentale pouvaient être distingués. Une vérification complète du statut d’un échantillon pour l’IBDV a été obtenue en moins de 40 min du moment de l’extraction de l’ARN viral, qui pouvait être alors ajouté directement au mélange de réaction du RT-LAMP.
(Traduit par Docteur Serge Messier)